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斜面低温保藏法对那些能够使用

此方法是很常用的，广泛适用于***、酵母菌和霉菌等大多数微生物的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的。

此方法的缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，较容易发生变异和被污染。

正常情况下的保菌期：霉菌和有芽孢的***一般可保存6个月左右，无芽孢的***可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。

低温生物的寄主分离法

即从生长有某种***的寄主体上(如茯苓、木耳木段)取下木片，进行分离的方法。如木耳制种时，可选朵大、出耳多、质厚的耳棒(即长有木耳的木段)。采集后，削去耳根下的树皮，将其横断面锯成1 厘米厚的木片，在无菌条件下，切去无耳菌丝部分，留下有耳菌丝部分，浸入0 . 1 %水中1 分钟，取出再用无菌水冲去木片上的液。然后，用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块，放入斜面培养基内，置24 ~26 ℃下培养，及时淘汰杂菌，选取纯菌丝进行移植培养，即得。

防止低温生物退化的措施

1.合理的育种 选育时所处理的细胞应使用单核的，避免使用多核细胞；

合理选择诱变剂的种类和剂量或增加突变位点，以减少分离回复；在诱变处理后进行充分的后培养及分离纯化，以保证保藏纯碎。这些可有效的防止的退化。

2.选用合适的培养基有人发现用老苜蓿根汁培养基培养“5406”抗生菌—细黄链霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌产生菌—藤仓赤霉的培养基中，加入糖蜜、天门冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘醇等物质时，也有防止退化的效果。也有选取营养相对贫乏的培养基做保藏培养基，如培养基中适当限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因为变异多半是通过菌株的生长繁殖而产生的，当培养基营养丰富时，菌株会处于旺盛的生长状态，代谢水平较高，为变异提供了良好的条件，大大提高了菌株的退化几率。

3.创造良好的培养条件 在生产实践中，创造和发现一个适合原种生长的条件可以防止退化，如低温、干燥、缺氧等。在栖土曲霉3．942 的培养中，有人曾用改变培养温度的措施(从20-30℃提高到33-34℃)来防止它产孢子能力的退化。

4.控制传代次数由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的。所以应尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代降低到很低的水平，以降低自发突发的机率。传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而发生退化的机会就越多。这要求不论在实验室还是在生产实践上，必须严格控制的移种传代次数，并根据保藏方法的不同，确立恰当的移种传代的时间间隔。如同时采用斜面保藏和其它的保藏方式（真空冻干保藏、砂土管、液氮保藏等），以延长保藏时间。