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发布时间:2022-06-27 04:28:01
低温生物的原理
保藏有多种方法,其原理大多大同小异,主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢,达到延长生命,减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。
低温主要对产生两方面的影响,首先,较低的温度可以减缓机体细胞的酶活,降低新陈代谢,达到保藏的目的。其次,低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制,如果降温过程失误,同样会造成机体的机械损伤和溶质损伤。
微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。
生物有机肥产品生产使用现状
***类生产用除常见的芽孢外, 还出现了高地芽孢菌、 类干酪乳菌、 屎肠球菌、 盐居固氮菌等新, 其中, 高地芽孢菌和盐居固氮菌普遍存在于土壤环境中, 未见致病性报道, 属风险一级; 类干酪乳菌又名为副干酪乳菌, 虽为风险一级 , 但有从动物受伤部位分离到该菌的报道;屎肠球菌属于乳酸菌类,属风险二级, 建议谨慎使用。伯克霍尔德氏菌是一些具有生物防治、 促进植物生长和生物修复等功能的***, 但同时也是可以引起鼻疽、 类鼻疽病的致病菌, 因此***伯克霍尔德氏菌属于风险三级, 需做致病性试验, 建议慎用或不用。***类生产用菌株主要为丝状***和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 长枝木霉、 绿色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉红螺旋聚孢霉、 金龟子绿僵菌等属于生物安全风险等级二级, 需按照NY/T 1109-2017 《微生物肥料生物安全通用技术准则》 进行毒理学测试。酵母菌主要以酿酒酵母为主, 还有少量东方伊萨酵母、杰丁塞伯林德纳氏酵母 (原产朊假丝酵母、 杰丁毕赤酵母)、 膜醭毕赤酵母、 解脂耶罗威亚酵母等, 属于生物安全风险等级一级, 可免做毒理学试验。
低温生物贮存的方式
1.冷冻真空干燥法。将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于灭菌的、卵白、脱脂奶制成菌悬液,将悬液以无菌操作分装于灭菌的玻璃安瓿瓶中,每管约0.3-0.5毫升,然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接,安瓿瓶放在冷冻槽中于-30℃至-40℃迅速冷冻,并在冷冻状态下抽空干燥,并在真空状态下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本较高。
2.液氮超低温保藏法。首先将要保藏的制成菌悬液备用;其次,准备安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷冻保护剂10%(体积比)甘油蒸馏水溶液,塞棉塞灭菌(1公斤/平方厘米,5分钟)。无菌检查后,接入要保藏的,火焰熔封瓶口,检查是否漏气,将封好口的安瓿瓶放在***器内,以每分钟下降1℃的速度缓慢降温,使保藏品逐步均匀地***,直至-35℃,以后***速度就不需控制,安瓿***后立即放入液氮罐内,在-150至-196℃保藏,该法只有少数科研院所使用。
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